昆虫・その他へのエレクトロポレーションによる遺伝子導入

NEPA21エレクトロポレーション装置

ｽﾗｲﾄﾞｶﾞﾗｽ･ｼｬｰﾚ･ｶﾊﾞｰ電極

ﾆｰﾄﾞﾙ･ｽﾃｨｯｸ・その他電極

ｹｰﾌﾞﾙ･ﾌｯﾄｽｲｯﾁ

昆虫・その他へのエレクトロポレーションによる遺伝子導入

アプリケーション

エレクトロポレーション法による成体ミツバチ脳へのIn Vivo遺伝子導入

In Vivo エレクトロポレーション

  1. 首の固定：ミツバチ成虫を氷冷麻酔し、チューブ中に差し込んだ後、２枚のU字型のプラスチック板を差し込んで首を固定する。
  2. ミツバチの保定：プラスチック板をチューブに接着し、ミツバチを外科手術可能な状態でチューブ中に保定する。 この状態で顕微鏡下、頭部クチクラを切除し内部を露出させる。
  1. ミツバチ頭部へのミクロピペットと電極の模式図：電極はキノコ体をはさむように置き、その中央にDNA溶液を満たしたミクロピペットを挿入する。DNAは浸透圧をあわせたミツバチ用リンゲル液に溶解する。AN：触角、C：複眼、MB：キノコ体、Oc：個眼、OL：視葉
  2. エレクトロポレーションによる遺伝子導入：脳室が無いため注入されたDNA溶液は脳を包むように拡散していく。 そこで注入が終わると同時にNEPA21/CUY21EDITにより 50V、50msec/secの矩形波を与える。スケールバー：300μm

文献

  • Eutardigrade

クマムシ

In vivo expression vector derived from anhydrobiotic tardigrade genome enables live imaging in Eutardigrada

Tanaka S, Aoki K, Arakawa K.

Proc Natl Acad Sci U S A. 2023 Jan 31;120(5):e2216739120.

  • メキシコサンショウオ
  • 下顎骨

Neural regulation in tooth regeneration of Ambystoma mexicanum

Makanae A, Tajika Y, Nishimura K, Saito N, Tanaka JI, Satoh A.

Sci Rep. 2020 Jun 9;10(1):9323.

  • メキシコサンショウオ
  • Blastema

Von Willebrand Factor D and EGF Domains Is an Evolutionarily Conserved and Required Feature of Blastemas Capable of Multitissue Appendage Regeneration

Nicholas D Leigh, Sofia Sessa, Aline C Dragalzew, Duygu Payzin-Dogru, Josane F Sousa, Anthony N Aggouras, Kimberly Johnson, Garrett S Dunlap, Brian J Haas, Michael Levin, Igor Schneider, Jessica L Whited

Evol Dev 2020 Mar 12 [Online ahead of print]

  • ナミアゲハの幼虫

Prepatterning of Papilio xuthus caterpillar camouflage is controlled by three homeobox genes: clawless, abdominal-A, and Abdominal-B

Jin H, Seki T, Yamaguchi J, Fujiwara H.

Sci Adv. 2019 Apr 10;5(4):eaav7569.

  • アフリカツメガエル
  • Blastema

Hyperinnervation improves Xenopus laevis limb regeneration

Mitogawa K, Makanae A, Satoh A.

Dev Biol. 2018 Jan 15;433(2):276-286.

  • コオロギ

Targeted gene delivery in the cricket brain, using in vivo electroporation.

Matsumoto CS, Shidara H, Matsuda K, Nakamura T, Mito T, Matsumoto Y, Oka K, Ogawa H.

J Insect Physiol. 2013 Dec;59(12):1235-41.

  • アフリカツメガエル
  • 胚

A versatile protocol for mRNA electroporation of Xenopus laevis embryos

Chernet BT, Levin M.

Cold Spring Harb Protoc . 2012 Apr 1;2012(4):447-52.

  • ミジンコ

Introduction of foreign DNA into the water flea, Daphnia magna, by electroporation.

Kato Y, Kobayashi K, Watanabe H, Iguchi T.

Ecotoxicology. 2010 Mar;19(3):589-92.

  • プラナリア

Transgenic planarian lines obtained by electroporation using transposon-derived vectors and an eye-specific GFP marker

González-Estévez C, Momose T, Gehring WJ, Saló E.

Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Nov 25;100(24):14046-51.

  • アフリカツメガエル
  • 胚

Improved mRNA electroporation method for Xenopus neurula embryos

Sasagawa S, Takabatake T, Takabatake Y, Muramatsu T, Takeshima K.

Genesis. 2002 Jun;33(2):81-5.

エレクトロポレーション

ドラッグデリバリー・遺伝子導入

電気式細胞融合

蛍光組織染色・in situ HCR

細胞分離

1細胞回収・マイクロダイセクション

細胞凍結

細胞･微生物培養 (解析/計数/伸展/灌流)

In vivo 超音波イメージング

卵振動培養