T細胞へのmRNAの遺伝子導入・デリバリー

GenVoy-ILM™ T Cell キット mRNA用

NanoAssemblr® Spark™

NanoAssemblr Ignite™・Ignite+™

T細胞へのmRNAの遺伝子導入・デリバリー

アプリケーション

T細胞への容量依存的な導入効率と高い細胞生存率

以下は、活性化したヒトプライマリーT細胞へのCD19 CAR mRNAの遺伝子導入結果です。
高い細胞生存率を維持しながら、均一な細胞集団への高い遺伝子導入効率が示されています。

A. CD19 CARの発現率（RNAの濃度毎）

B. フローサイトメトリーによる検出結果（RNAの濃度毎）

C. 細胞生存率（未処理コントロールとの比較）

- Off-the-Shelf細胞治療向け - T細胞のマルチステップエンジニアリング

CD19 CARの高い発現と高効率なゲノム編集ノックアウトを実現することで、CD19+腫瘍細胞を高い効率で殺すことができる実用的な「ユニバーサル」CAR T細胞の作製が可能です。

  1. 実験のワークフロー：

sgRNAとCas9 mRNAを含むmRNA-LNPをプライマリーT細胞に加える。細胞を増殖してからCD19 CAR mRNA-LNPを加える。24時間後にCD19+ B細胞傷害試験を16時間行う。

  1. TCRノックアウト効率の評価：

Starting sampleは、TCR陰性集団を更に抽出するために選択されたTCR陰性サンプル

  1. 【左】CAR mRNA-LNPで処置（細胞100万個あたりRNA 3.2μg）して24時間後のTCR+の細胞集団とTCR-の細胞集団のCD19 CAR発現率、【右】非処置群と比べた細胞生存率
  1. CD19+ B細胞（SUP-B15)の傷害アッセイ：

全ての群でT細胞100万個あたりRNA 3.2μgで処置。UT（未処置）T細胞、TCR+/CAR+ T細胞、遺伝子編集されたTCR-/CAR+ T細胞を、E：T（エフェクター細胞と標的細胞の比率）を変えて比較（T検定もしくは分散分析を使用）

文献

    Multiplexed LNP-mRNA vaccination against pathogenic coronavirus species

    Lei Peng, Zhenhao Fang, Paul A Renauer, Andrew McNamara, Jonathan J Park, Qianqian Lin, Xiaoyu Zhou, Matthew B Dong, Biqing Zhu, Hongyu Zhao, Craig B Wilen, Sidi Chen

    Cell Rep . 2022 Aug 2;40(5):111160.

      Variant-specific vaccination induces systems immune responses and potent in vivo protection against SARS-CoV-2

      Lei Peng, Paul A Renauer, Arya Ökten, Zhenhao Fang, Jonathan J Park, Xiaoyu Zhou, Qianqian Lin, Matthew B Dong, Renata Filler, Qiancheng Xiong, Paul Clark, Chenxiang Lin, Craig B Wilen, Sidi Chen

      Cell Rep Med . 2022 May 17;3(5):100634.

      エレクトロポレーション

      ドラッグデリバリー・遺伝子導入

      電気式細胞融合

      蛍光組織染色・in situ HCR

      細胞分離

      1細胞回収・マイクロダイセクション

      細胞凍結

      細胞･微生物培養 (解析/計数/伸展/灌流)

      In vivo 超音波イメージング

      卵振動培養