ニワトリ（In Ovo・その他）へのエレクトロポレーションによる遺伝子導入

1. ニワトリ1.5日胚の脳胞へFast Greenを含むプラズミド溶液（青色）を注入する。
2. 脳胞の左右に平行電極を置き、25V、50msの電圧を1秒間隔で4回かける。
3. GFP遺伝子を導入した場合、24時間後にはGFP蛍光が各脳胞で強く検出される。
4. GFP遺伝子導入48時間後でもGFP蛍光が検出される。
5. 図4の胚を上部から見ると、遺伝子導入は胚の右側の脳胞に限局されていることがわかる。

1. 導入効率を共導入したGFPにより検出。
2. En2に対するshRNAを設計。 in situ hybridizationによってmRNAの分解を検出した。
3. En2の正常な発現。エレクトロポレーション法とsiRNA法を組み合わせることで、簡便な遺伝子の機能阻害法を実現できる。

1. ウェッケルの刃の片方を前胃の内腔に挿入し、切開しPBS(-)に移す。
2. ゲルを電極におさまるように適当な大きさに剃刀で切り、PBS(-)に浸しておく。
3. ゲルを電極に納め、周囲をPBS(-)で満たす。 ウェルの内側のPBS(-)をピペットマン（P200）で丁寧に吸い取って除き、プラスミドDNA溶液（12～15μl）で満たす。 前胃を上皮が陰極に向くようにして入れる。
4. 設定電圧30V、パルス時間50msの電圧を、75msの間隔で15回掛ける。 ただちにゲルを取り出し、サリエールに入れたダイロード液で濯ぐ。 前胃を取り出し、新たなダイロード液に移す。

腺形成のメカニズムを研究するために、上皮細胞に種々の遺伝子を導入し、その機能解析を行っている。 ここでは、その対照実験として、5.5日胚前胃の上皮に、GFP発現ベクターをエレクトロポレーション法で導入した例を示す。

2日間培養後、導入した遺伝子（GFP）の発現が上皮のみに見られる。 上皮の陥入が始まり、cSP遺伝子の発現が消失し始めている【図1】。 3日間培養後、胃腺が形成され、内腔上皮でcSP遺伝子が正常に発現していることから、エレクトロポレーション法による異常がないことが分かる【図2】。 GFPは内腔上皮でも腺上皮でも発現している。